新冠病毒的肆虐引發(fā)了對(duì)疫苗的迫切需要，疫苗研發(fā)從常規(guī)的8~10年縮短至1~2年，對(duì)加速整個(gè)疫苗研發(fā)及工藝流程提出了新的技術(shù)要求。作為疫苗研發(fā)的神器，Octet®分子互作分析系統(tǒng)在新冠疫苗研發(fā)中大顯神威，知名的幾個(gè)新冠疫苗研發(fā)過程中都有它的身影，而且Octet®采用的生物層干涉（BLI）技術(shù)也是美國(guó)藥典中用于結(jié)合活性和定量檢測(cè)的標(biāo)準(zhǔn)方法，能夠從以下幾個(gè)方面加速疫苗研發(fā)：

疫苗的快速濃度測(cè)定

疫苗的結(jié)合活性研究

疫苗效果評(píng)價(jià)和機(jī)制研究

殘留物測(cè)試

疫苗濃度的快速測(cè)定

將針對(duì)疫苗的受體或抗體固化在傳感器上，然后快速檢測(cè)疫苗效價(jià)（濃度），整個(gè)實(shí)驗(yàn)可以在10分鐘內(nèi)完成，檢測(cè)濃度范圍在0.1 - 1000 ug/mL，覆蓋疫苗生產(chǎn)過程中的濃度范圍，樣品往往不需要稀釋。目前BLI技術(shù)廣泛用于HPV以及流感等疫苗的濃度測(cè)定，非常適合疫苗生產(chǎn)的中間過程以及成品快速Q(mào)C。

只需要四步：

將能夠結(jié)合病毒的受體或者抗體固化在傳感器上（比如唾液酸糖是流感病毒的受體），1-3分鐘；

用樣品的基質(zhì)平衡， 1-2分鐘；

結(jié)合含有分析物的樣品，2-5分鐘；

分析：根據(jù)結(jié)合曲線的起始斜率計(jì)算樣品濃度。

新冠疫苗結(jié)合活性研究

基于重組蛋白或者mRNA的新冠疫苗一般是Spike蛋白結(jié)構(gòu)域，與受體ACE2的結(jié)合活性可反映其構(gòu)象的正確性，是產(chǎn)生中和抗體的前提。Octet®在測(cè)結(jié)合活性方面具備更多優(yōu)勢(shì)：

實(shí)時(shí)非標(biāo)記，直接檢測(cè)疫苗和受體的結(jié)合，沒有洗滌步驟的干擾

測(cè)試速度快，一般10分鐘內(nèi)結(jié)束

可以計(jì)算結(jié)合速率常數(shù)和解離速率常數(shù)，對(duì)結(jié)合活性更加定量化

與其他技術(shù)相比，無(wú)流路，操作簡(jiǎn)便，通量高，維護(hù)簡(jiǎn)單，耗材便宜

Novavax公司的NVX-CoV2373是一種新冠納米顆粒疫苗，由三聚體的全長(zhǎng)的SARS-CoV-2的S蛋白和Matrix-M1佐劑組成，已獲批上市。S1/S2亞基剪切位點(diǎn)682-RRAR-685突變到682-QQAQ-685，以及位于CH的986/987位氨基酸殘基突變成了脯氨酸。Octet®檢測(cè)該疫苗與ACE2的結(jié)合是非常強(qiáng)的，解離明顯慢于野生型S蛋白。

mRNA新冠疫苗BNT162b2（輝瑞&BioNTech），也使用Octet®檢測(cè)其表達(dá)產(chǎn)物與ACE2的親和力（nM級(jí)別），并且和已知中和抗體B38也有結(jié)合，說明其維持了中和抗體表位。所以，Octet®可以通過檢測(cè)結(jié)合活性來(lái)對(duì)mRNA疫苗的基因序列進(jìn)行篩選。

疫苗評(píng)價(jià)——

血清中抗體效價(jià)的確定

針對(duì)疫苗的免疫血清的效價(jià)測(cè)試也是判斷疫苗免疫原性的重要指標(biāo)。一般將疫苗固化在傳感器上，直接檢測(cè)不同稀釋度的免疫動(dòng)物/人血清，快速檢測(cè)血清中抗體的效價(jià)，并可以通過計(jì)算解離常數(shù)或者結(jié)合信號(hào)獲知抗體的結(jié)合能力。傳統(tǒng)方法只能獲得效價(jià)，而無(wú)法獲得抗體的結(jié)合能力。Octet®可以在1個(gè)小時(shí)內(nèi)完成80份血清樣品的檢測(cè)。

疫苗評(píng)價(jià)——

保護(hù)性抗原表位檢測(cè)

通過檢測(cè)疫苗與一系列已知表位的中和抗體的親和力，獲知疫苗是否保持了正確的構(gòu)象，并判斷誘導(dǎo)中和抗體表位的能力。主要用于亞單位疫苗和VLP疫苗。